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Análise da Influência do número de cópias na expressão do gene blaKPC
(2021-03-05) Oliveira, Michelly Maria Pereira e; Almeida, Anna Carolina Soares; http://lattes.cnpq.br/4153747599532886
As enterobactérias tem se destacado na prática clínica pela detecção de mecanismos enzimáticos que conferem resistência a antimicrobianos, destacando-se a Klebsiella pneumoniae carbapenemase (KPC) devido a sua rápida disseminação mundial ocasionada pela localização do gene blaKPC em grandes plasmídios transferíveis e transposons. A expressão do gene blaKPC pode ser afetadas por características intrínsecas do hospedeiro que o abriga ou número de cópias. Um fenótipo não usual foi observado em isolados clínicos de P. stuartii e M. morganii e seus respectivos transformantes, onde as células de E. coli receptoras de plasmídeos que carregavam o gene blaKPC, apresentaram valores de CIMs, para alguns beta-lactâmicos, maiores do que nos isolados clínicos. O objetivo deste trabalho foi analisar o número de cópias do gene blaKPC, relacionando-os com seus os respectivos CIMs. O DNA genômico dos isolados bacterianos foi extraído a partir do kit PromegaTM WizardTM Genomic DNA Purification conforme orientações do fabricante, e em seguida, foi quantificado por espectofotometria através do equipamento NanoDropTM Lite da Thermo Fisher Scientific. Os genes de controle endógenos foram escolhidos a partir da literatura depois de uma busca robusta, em seguida foram analisados in silico. Utilizando bancos de dados, softwares e outras ferramentas, os primers foram desenhados. Para a realização da quantificação absoluta, foi realizada uma estimativa baseada em uma proporção da relação quantitativa relativa entre alvo e o controle endógeno, utilizando a fórmula 2-ΔCq. Para os experimentos foi utilizando o equipamento SteponeTM Real-time PCR System (Applied Biosystems) e o corante SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems). Os primers desenhados passaram por uma etapa de validação visando avaliar sua eficiência (tufMm - 93.019, tufPs - 90.228 e tufKp - 103.474, ambos com R2próximos de 1). Os dados gerados pelos experimentos de qPCR absoluta foram associados com os distintos perfis fenotípicos observados e a partir dos ensaios foi determinado que o número de cópias do gene blaKPC para os isolados transformantes e para os isolados clínicos não variam significativamente, apontando que outro mecanismo deve estar interferindo na expressão do gene blaKPC, influenciando diretamente os níveis de resistência.
Análise da suceptibilidade aos antimicrobianos em Pseudomonas spp. isoladas de produtos saneantes
(2020-02-03) Vitor, Mizânia Cabral de Almeida; Almeida, Anna Carolina Soares; Souza, Paula Mariana Salgueiro de; http://lattes.cnpq.br/6281410502740086; http://lattes.cnpq.br/4891800920829895
O objetivo deste trabalho foi avaliar diferentes tipos de produtos saneantes, identificando a presença de microrganismos oportunistas patogênicos, em especial Pseudomonas, e conhecer a suscetibilidade aos antimicrobianos. Foram coletadas amostras durante setembro de 2019 e janeiro de 2020 para isolamento de possíveis microrganismos patogênicos oportunistas e a partir destes, foram realizados testes com 7 antimicrobianos, sendo eles amicacina, ceftazidima, cefepime, gentamicina, imipenem, aztreonam e polimixina, através do método disco-difusão. Foram recuperadas 17 cepas ao longo do estudo, que apresentaram sensibilidade à maioria dos antimicrobianos citados. Uma das cepas de Pseudomonas spp., apresentou resistência a cefepime e três cepas apresentaram resistência a amicacina.
Análise de mecanismos de resistência em bactérias clínicas oriundas de hospitais de Pernambuco
(2021-02-17) Silva, Jonas de Melo Silvestre da; Almeida, Anna Carolina Soares; http://lattes.cnpq.br/4891800920829895; http://lattes.cnpq.br/9044602995334190
A disseminação de bactérias resistentes ou superbactérias vem sendo considerada uma ameaça catastrófica para a saúde da população e representa um dos principais desafios na área da saúde em todo o mundo. O objetivo principal deste trabalho é a identificação dos determinantes genéticos, moleculares, mecanismos de resistência e a relação clonal entre vinte e dois isolados obtidos de dois hospitais de Pernambuco. Foram incluídos isolados de: Klebsiella pneumoniae, Klebsiella ozaenae, Escherichia coli e Enterobacter spp, onde todos apresentaram perfil fenotípico de resistência a multidrogas (MDR). Os isolados provenientes do Hospital Universitário da Universidade Federal do Vale do São Francisco apresentaram perfil de resistência mais alto em relação aos isolado do Hospital Universitário Oswaldo Cruz localizado em Recife, principalmente a aminoglicosídeos e cefalosporina 3º e 4º geração. Pela técnica de Reação em cadeia da polimerase (PCR) foi possível detectar pelo menos um dos genes resistência B-lactâmico a testados em todos os isolados, com exceção de 2 isolados que não apresentaram nenhum dos genes avaliados. O gene blaCTX-M foi o mais prevalente encontrado nesse estudo. E apesar de metade das amostras terem perfil de resistência a carbapenêmicos, o gene blaKPC foi o menos detectado. Além disso, pela análise de relação clonal através da técnica REP-PCR revelou uma possível endemicidade de um único tipo clonal na Unidade de Terapia Intensiva no Hospital Universitário Oswaldo Cruz localizado em Recife. Já no Hospital Universitário da Universidade Federal do Vale do São Francisco foi identificado estabelecimento de dois grupos clonais que estão disseminados a pelo menos 3 meses. A presença de bactérias multirresistentes em unidades hospitalares reforça a necessidade de estratégias para contenção de infecções e da disseminação desses patógenos, principalmente nas UTIs.
Atividade antimicrobiana de óleos essenciais de orégano (Origanum vulgare), pimenta rosa (Schinus terebinthifolia) e melaleuca (Melaleuca alternifólia) frente aos patógenos de origem alimentar
(2024-02-21) Silva, Esterfani Pereira da; Soares, Luciana Felizardo Pereira; http://lattes.cnpq.br/4071178363761831; http://lattes.cnpq.br/3144149210017027
Nos últimos anos a utilização dos aditivos sintéticos, para prevenir a deterioração dos microrganismos nos alimentos, tem sido um fator preocupante para a indústria alimentícia, visto seus impactos negativos sobre a saúde dos consumidores. Com o intuito de superar esse impasse, os óleos essenciais surgem como alternativa, contendo compostos e princípios ativos que inibem o desenvolvimento dos microrganismos. Sendo assim, objetivou-se avaliar a concentração inibitória mínima (CIM) e a concentração bactericida mínima (CBM) dos óleos essenciais de Melaleuca (Melaleuca alternifólia), Orégano (Origanum vulgare) e Pimenta rosa (Schinus terebinthifolia) obtidos comercialmente. Para o estudo, foram utilizados isolados bacterianos na concentração de 3,5 x 107 UFC/ml (0.5 na escala Mc Farland) de Staphylococcus aureus (ATCC 25923), e Escherichia coli (ATCC 25922) obtidos comercialmente da American Type Culture Collection. As placas incubadas foram analisadas visualmente para determinação da concentração inibitória mínima (CIM), nos poços em que foram observados inibição do crescimento bacteriano, 20 μL das suspensões foram coletados e semeados em placas com ágar Mueller-Hinton em estufa a 37ºC por 24 horas, para análise do crescimento bacteriano e determinação da concentração bactericida mínima (CBM). Observou-se valores médios de CIM mediante aplicação dos óleos essenciais de orégano, de pimenta rosa e de melaleuca, 2500 μg/ml, de 650 μg/ml e de 500 μg/ml para as cepas de E. coli, respectivamente, enquanto que a concentração inibitória mínima dos tratamentos se equivaleram em 500 μg/ml para o grupo bacteriano de S. aureus. No que diz respeito a CBM, obteve-se as concentrações médias para os óleos essenciais de orégano, de pimenta rosa e de melaleuca, 2500 μg/ml, 625 μg/ml e 5000 μg/ml em frente as cepas de E. coli e 1250 μg/ml, 2500 μg/ml e 625 μg/ml para a bactérias gram-positivas S. aureus, respectivamente.
Emprego de antimicrobianos na pecuária bovina e suas implicações na saúde pública
(2021-12-15) Gomes, Lucas da Silva Ferreira; Coutinho, Luiz Teles; http://lattes.cnpq.br/8812254003382110; http://lattes.cnpq.br/6350534197203776
A utilização de antimicrobianos (ATM) em ruminantes é uma ferramenta responsável por uma significativa propulsão na produção animal por reduzir os índices de morbidade e mortalidade oriundos de problemas sanitários, propiciando assim melhoria do perfil sanitário e índices produtivos, e consequentemente maior qualidade e seguridade dos alimentos de origem animal. Entretanto, a alta capacidade de adaptação da célula bacteriana associada à pressão seletiva imposta pelo uso indiscriminado dos ATM em animais e também em humanos, vêm promovendo o desenvolvimento da resistência antimicrobiana (RAM) em todo o mundo, sendo este um dos mais importantes problemas que atinge e interliga a Medicina Humana e Veterinária, pois ambas compartilham o uso de uma gama de ATM comuns, aliado ao fato de que bactérias resistentes aos antimicrobianos (BRA’s) e genes relacionados com resistência aos antimicrobianos (GRA's) podem ser transferidos entre animais, meio ambiente e seres humanos, tornando esse fenômeno um agravo a saúde única global. Destaca-se a necessidade de monitoramento constante da utilização de ATM, afim de conter o surgimento e/ou expansão de cepas bacterianas resistentes, assim como a integração entre profissionais na mobilização da sociedade como um todo visando preservar a saúde única. Neste contexto, objetivou-se realizar esta revisão de literatura sobre alguns aspectos da utilização de antimicrobianos em bovinos, bem como o surgimento de cepas bacterianas resistentes e seus impactos na saúde pública.
Estudo químico e atividade antimicrobiana das folhas de Piper callosum e Piper corcovadensis (Piperaceae)
(2019-02-22) Lima, Jéssica Bruna de; Ramos, Clécio Souza; http://lattes.cnpq.br/3782004073843685; http://lattes.cnpq.br/8759155622677149
Este trabalho teve como principal objetivo descrever a investigação fitoquímica e atividade antimicrobiana de compostos isolados das folhas de P. callosum e P. cocorvadensis, pertencente à família Piperaceae. Foram isolados de Piper callosum e P. cocorvadensis três amidas, incluindo a piperovatina, 4,5 dihidropiperlonguminina e piplartina e o éster (E) – 3,4,5 trimetoxicinamico de metila. Em função da atividade antimicrobiana os extratos e compostos isolados foram submetidos a ensaios frente 06 (seis) micro-organismos. O 1º extrato etanólico, o éster (E)-3,4,5-trimetoxicinamato de metila e a amida 4,5 dihidropiperlonguminina isolados de P. callosum apresentou atividade antimicrobiana frente a Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa e com CMI de 625 μg/mL.. Além disso o 2º extrato extrato etanólico apresenta atividade em uma concentração 312,5 μg/mL contra a Candida utilis. Ao analisar os extratos etanólicos da Piper corcovadensis, foi observado atividade frente atividade frente a Enterococcus faecalis e Bacillus subtilis com CMI de 19,5 μg/mL e 39,0 μg/mL, respectivamente. Os compostos obtidos foram caracterizados com base em seus respectivos dados espectrais de CG-EM, RMN 1H e 13C.
Identificação química e atividade antimicrobiana de óleos essenciais das folhas de Piper marginatum obtidos em meio ácido, básico e neutro
(2019-12-18) Claudino, Líbna Larissa Monteiro; Ramos, Clécio Souza; http://lattes.cnpq.br/3782004073843685; http://lattes.cnpq.br/1342247970543261
O aumento da resistência dos microrganismos patogênicos aos antimicrobianos convencionais tem sido enfrentado como um problema de saúde pública em nível mundial. O uso generalizado de antimicrobianos no tratamento de infecções causadas por patógenos favorece a resistência microbiana, tornando ineficaz a ação desses medicamentos. A busca por novos compostos vegetais se torna uma alternativa inovadora como uma excelente fonte de novas moléculas bioativas. O presente trabalho tem por objetivo determinar a composição química, assim como, avaliar a atividade antimicrobiana de óleos essenciais das folhas de Piper marginatum em meio básico, ácido e neutro. A coleta do material vegetal foi feita na Reserva Dois Irmãos situada na cidade do Recife no campus da Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE). Os óleos essenciais extraídos das folhas da Piper marginatum foram obtidos pela técnica da hidrodestilação, utilizando o aparelho do tipo Clevenger e a identificação de seus constituintes químicos foram determinados por CG-EM. Para obtenção do óleo em meio ácido foi preparado uma solução ácida de ácido sulfúrico: ácido nítrico na proporção molar (1:1), bem como para obtenção em meio básico, foi preparado uma solução básica de hidróxido de potássio a uma concentração de 5 Mol.L-1. Para avaliação da atividade antimicrobiana foi utilizado o método de CMI (Concentração Mínima Inibitória). Os resultados mostraram que o óleo obtido em meio ácido apresentou melhor atividade frente a bactéria gram-negativa Escherichia Coli com CMI de 78,1 μg/ml e aos fungos Candida Albicans e Candida Utilis com CMI de 312 μg/ml e 78,1 μg/ml, respectivamente. As atividades dos óleos em meio básico e neutro foram consideradas de moderadas a fracas para todos os microrganismos testados, e apresentaram CMI que variou entre 625 μg/ml e 2500 μg/ml para ambos os óleos. Sobre a identificação dos constituintes, os compostos majoritários encontrados nos óleos obtidos em meio básico e neutro foram o Macrocarpeno, e Z-Asarona, respectivamente. Os resultados obtidos contribuem para o conhecimento químico e biológico da P. Marginatum, que é amplamente divulgada na população como uma excelente planta para fins terapêuticos.
Investigação do extrato de cladódios de Cereus jamacaru quanto à composição química, potencial antimicrobiano contra Staphylococcus aureus e efeito larvicida para Aedes aegypti
(2023-09-21) Guimarães, Júlia Maria Rodrigues; Pontual, Emmanuel Viana; Alves, João Victor de Oliveira; http://lattes.cnpq.br/0882174483226946; http://lattes.cnpq.br/1777060469196142; http://lattes.cnpq.br/3701748857935689
Cereus jamacaru (Cactaceae) é uma planta do semiárido brasileiro que possui importância econômica e uso na medicina popular. O uso dos antibióticos atualmente comercializados acarreta em muitos efeitos indesejados e tem levado ao surgimento de bactérias resistentes, enquanto os inseticidas sintéticos possuem, geralmente, alta persistência no ambiente e forte toxicidade não alvo. Nesse sentido, a busca por novos agentes antimicrobianos e inseticidas tem crescido. O objetivo deste trabalho foi investigar o extrato de cladódios de C. jamacaru quanto à composição química (presença de lectinas, inibidor de proteases e metabólitos secundários), potencial antimicrobiano contra bactérias patogênicas e efeito larvicida para Aedes aegypti. Cladódios de C. jamacaru foram coletados em Recife, Pernambuco. Os espinhos foram removidos e os cladódios foram cortados em fatias e secos ao ar. Em seguida, foram triturados e o pó (10 g) foi homogeneizado (28°C, 16 h) com solução de NaCl 0,15 M (100 mL) em água, utilizando agitador magnético. A mistura foi filtrada e centrifugada (3.000 g, 15 min) e o sobrenadante correspondeu ao extrato de cladódios (CjCE) que foi investigado quanto à presença de lectinas utilizando eritrócitos de coelho, inibidor de protease utilizando tripsina bovina (0,1 mg/mL) e o substrato cromogênico e peptidomimético BApNA (8 mM), e metabólitos secundários por cromatografia em camada delgada. O conteúdo de compostos fenólicos em CjCE foi determinado utilizando o reagente de Folin-Ciocalteu (10%, v/v) e uma curva padrão de ácido gálico, enquanto flavonoides foram quantificados utilizando o reagente cloreto de alumínio (20%, m/v) e quercetina como padrão. Em seguida, o extrato foi investigado quanto à atividade antioxidante pelos métodos do DPPH, ABTS e Fosfomolibdênio. O potencial antibacteriano de CjCE foi determinado utilizando cepas de bactérias sensíveis ou resistentes a antibióticos pelo método de microdiluição em placa. A concentração mínima inibitória (CMI, menor concentração de CjCE capaz de inibir em 50% o crescimento bacteriano) foi determinada. Ensaio de hemólise por S. aureus foi realizado utilizando eritrócitos humanos e o efeito de CjCE (128, 64 e 32 µg/mL) sobre a hemólise foi investigado. O potencial larvicida de CjCE (0,40 a 3,5%, m/v) foi avaliado por tratamento (48 h) de larvas de A. aegypti no terceiro instar (L3). CjCE causou a aglutinação dos eritrócitos de coelho (8 UAH), sugerindo a presença de lectinas. O extrato reduziu a hidrólise do substrato BApNA por tripsina, indicando a presença de inibidor de proteases. A cromatografia em camada delgada de CjCE revelou a presença de açúcares redutores e análise quali-quantitativa mostrou 40,20±0,97 mgEAG/g de fenóis totais, dentre os quais, 3,36±0,07 mgEAG/g (8,36%) foram flavonoides. CjCE apresentou relevante atividade oxidante, com capacidade de sequestro dos radicais ABTS e DPPH (IC50 de 3.735 µg/mL e 2704, 50µg/mL, respectivamente), mas não foi hábil em causar redução do fosfomolibdênio. CjCE foi tóxico apenas para cepa de Staphylococcus aureus (UFPEDA 02) revelando um forte efeito bacteriostático (CMI de 199,09±0,85 µg/mL), e reduziu em mais de 90% a lise de eritrócitos causada pela bactéria, em relação ao controle. O tratamento de L3 de Ae. aegypti com CjCE acarretou em mortalidade de forma dose dependente (CL50 = 0,68 %, m/v). Por outro lado, quando as larvas foram tratadas com CjCE em concentração 10 vezes superior à CL50, houve eliminação do conteúdo intestinal coberto pela membrana peritrófica na tentativa de eliminar os componentes tóxicos do extrato. Em conclusão, o extrato de cladódios de C. jamacaru é um novo agente antimicrobiano capaz de inibir fortemente o crescimento de S. aureus e reduzir a toxicidade bacteriana para eritrócitos humanos. Ademais, a toxicidade para larvas de A. aegypti mostrada aqui aponta o extrato de cladódios de C. jamacaru como interessante material de partida para obtenção de formulações larvicidas. Os efeitos antibacteriano e inseticida do extrato podem estar ligados à presença de lectinas, inibidor de proteases e compostos fenólicos.
Investigação do potencial antibiofilme da lectina de folhas de Schinus terebinthifolia Raddi contra Staphylococcus aureus
(2019-12-20) Silva, Talyta Naldeska da; Pontual, Emmanuel Viana; Silva, Pollyanna Michelle da; http://lattes.cnpq.br/0563176148137978; http://lattes.cnpq.br/1777060469196142; http://lattes.cnpq.br/8762925956752737
Biofilmes são comunidades microbianas complexas que têm sido associadas à incidência de infecções, inclusive no ambiente hospitalar. Sua formação é considerada um fator determinante da virulência em microrganismos e contribui fortemente para a resistência aos antimicrobianos convencionais. Nesse sentido tem crescido a busca por compostos de origem natural com atividade antimicrobiana que sejam mais efetivos e menos tóxicos para células do hospedeiro. As plantas constituem importantes fontes de compostos bioativos, entre os quais podemos citar as lectinas, uma classe de proteínas ligadoras de carboidratos cuja ação antimicrobiana tem sido reportada. SteLL é uma lectina isolada de folhas de Schinus terebinthifolia Raddi (Anacardiaceae) com ação antimicrobiana previamente relatada. Neste trabalho foi avaliado o potencial antibacteriano e antibiofilme de SteLL contra isolados de Staphylococcus aureus, sensível (UFPEDA 02) e resistente a oxacilina (UFPEDA 670). STeLL foi agente bacteriostático e bactericida para os isolados UFPEDA 02 e UFPEDA 670 com CMI (Concentração Mínima Inibitória) de 12,5 e 25 μg/mL e CMB (Concentração Mínima Bactericida) de 50 e 100 μg/mL, respectivamente. A cinética de crescimento das células tratadas com SteLL revelou que houve inibição do crescimento de forma dose-dependente em relação ao controle. SteLL causou alterações morfométricas em células de S. aureus e inibiu a formação de biofilme de UFPEDA 02 nas concentrações entre 400 e 25 μg/mL e de UFPEDA 670 entre 400 e 100 μg/mL. Em conclusão, SteLL é um agente antibacteriano contra Staphylococcus aureus por inibir o crescimento, promover morte celular e inibir a formação de biofilme bacteriano.
Prospecção da atividade antimicrobiana de polissacarídeos extraídos das paredes celulares das leveduras Kluyveromyces marxianus, Kluyveromyces lactis e Saccharomyces cerevisiae
(2021-02-26) Araújo, Isabelle Maria Feitosa de; Ferreira, Éder Galinari; http://lattes.cnpq.br/7670722046479986; http://lattes.cnpq.br/5044579569126838
Polissacarídeos das mais diversas fontes, podem possuir atividades farmacológicas como, por exemplo, antioxidante, imunomoduladora, anticoagulante e antimicrobiana. Tendo em vista que esta última atividade ainda não foi avaliada, segundo nosso levantamento bibliográfico, para os polissacarídeos de parede celular das leveduras Kluyveromyces marxianus e Kluyveromyces lactis, o objetivo deste estudo foi o de verificar a atividade antimicrobiana de polissacarídeos extraídos das paredes celulares das leveduras Kluyveromyces marxianus CCT7735 e Kluyveromyces lactis CBS2359 e compará-las a uma levedura não-Kluyveromyces como a Saccharomyces cerevisiae CAT-1. Os testes de suscetibilidade foram realizados em placas de Petri (90 x 15 mm) pelo método de disco-difusão de Kirby-Bauer conforme preconizados pelo suplemento M 100 da 29ª edição do Clinical & Laboratory Standards Institute. Dez microlitros da solução de polissacarídeos (10 mg/mL) solubilizados em água destilada e esterilizados por filtração foram depositados sobre os discos de papel estéreis (6 mm). Os polissacarídeos foram testados frente a Escherichia coli ATCC 25922 (controle positivo: 100/10 μg de piperacilina-tazobactam); Staphylococcus aureus ATCC 29213 (controles positivos: 30 μg de cefoxitina e 10 unidades de penicilina); Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 (controles positivos: 100/10 μg de piperacilina-tazobactam e 10 μg de gentamicina); Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 (controle positivo: 10 μg de gentamicina) e Enterococcus faecalis ATCC 29212 (controles positivos: 30 μg de tetraciclina e 10 unidades de penicilina). Nenhuma das amostras de polissacarídeos de parede celular avaliadas inibiram o crescimento das linhagens de bactérias patogênicas testadas. Desta forma, pelo menos nas moléculas nativas, os polissacarídeos não apresentaram atividade antimicrobiana. Sugere-se que novos estudos sejam realizados com as amostras avaliadas, seja para outras aplicações/atividades farmacológicas ou com a modificação química ou alteração da concentração destes polissacarídeos, seguido de uma nova testagem quanto a atividade antimicrobiana, dentre outras.