Navegando por Assunto "Meios de cultura"

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Avaliação da produção de endotoxinas por Bacillus thuringiensis cultivado com substratos agroindustriais
(2019-12-13) Freitas, Lívia Santos de; Porto, Ana Lúcia Figueiredo; http://lattes.cnpq.br/4989617783837981; http://lattes.cnpq.br/3952630035656313
Em contrapartida ao uso exacerbado de pesticidas químicos, o controle biológico de pragas não acarreta danos socioambientais, além de ser altamente específico e eficiente. Um dos agentes biológicos amplamente utilizado é a bactéria Bacillus thuringiensis (Bt), que se caracteriza por produzir cristais proteicos, denominados de delta-endotoxinas, que apresentam alta toxicidade e especificidade para vários membros de Lepidoptera, Diptera, Coleoptera. Bt pode ser cultivado em diferentes tipos de meios de cultura, sendo fundamental a utilização de substratos menos onerosos a fim de baratear o produto final. Assim, visando desenvolver meios de cultura de baixo custo, o presente trabalho utilizou o extrato de palma forrageira (Opuntia), o xarope de sorgo (Sorghum) e o soro de leite como substratos alternativos para o cultivo de B. thuringiensis var. berliner 370 (Btb370). A necessidade de suplementação de nitrogênio foi avaliada através da adição de ureia 1 g/L. O meio de cultura Luria-Bertani líquido foi usado como meio de controle. Os meios de cultura foram submetidos a agitador rotativo a 200 rpm, 30 °C por 96 horas e foram avaliados o crescimento celular e a produção de delta-endotoxinas, esporos e proteases por Btb370. Além disso, houve também a análise morfológica dos cristais proteicos de Btb370 através de microscopia eletrônica de varredura. Observou-se que o meio à base de soro de leite sem a adição de ureia 1 g/L foi o que apresentou maior crescimento celular (4,28 g/L) e maior produção de delta-endotoxinas (568,26 μg/mL) e esporos (9,61 x 1010 UFC/mL) pela bactéria, superiores inclusive ao meio de controle. Os meios constituídos por xarope de sorgo e soro de leite sem suplementação de ureia proporcionaram os maiores valores de atividade proteásica (6013 U/mL e 5962 U/mL, respectivamente). Os meios à base de extrato de palma forrageira não apresentaram produção mensurável de delta-endotoxinas por Btb370. As morfologias dos cristais proteicos observadas foram: bipiramidal, esférica e cuboidal. Desta forma, verifica-se que o soro de leite foi o substrato mais eficiente para o crescimento, esporulação e produção de delta-endotoxinas por Bacillus thuringiensis var. berliner 370.
Desenvolvimento de meios de cultura alternativos para produção de endotoxinas produzidas por Bacillus thuringiensis
(2018-08-27) Oliveira, Débora Pessoa de; Bezerra, Raquel Pedrosa; http://lattes.cnpq.br/1466206759539320; http://lattes.cnpq.br/1037675318692431
O milho é um dos principais grãos da produção nacional, mas a sua produtividade não corresponde a potencialidade. Pragas como Spodoptera frugiperda tem afetado diretamente sua cultura. Nos últimos 50 anos, a forma mais efetiva de controle é o uso de pesticidas químicos que tem apresentado diversos problemas ambientais e de saúde pública. O Bacillus thuringiensis (Bt) é uma bactéria gram-positiva, esporulante, que possui a capacidade de produzir inclusões cristalinas com ação tóxica contra insetos. Bioinseticidas fabricados a partir de Bacillus thuringiensis são uma alternativa biológica aos inseticidas químicos. O biopesticida é fabricado incluindo os esporos e endotoxinas. Viabilizar o uso de agrosubstratos locais para a produção desta bactéria é uma alternativa para diminuir custos e fornece um produto acessível. O objetivo desse trabalho foi produzir endotoxina por B. thuringiensis utilizando meios alternativos constituído por extrato de palma e líquido metabólico microalgas fotossintetizantes. O B. thuringiensis foi cultivado em meios constituídos por extrato de palma e líquido metabólico do cultivo de Arthrospira platensis (meio A), ou Scenedesmus sp. (meio B), ou Chlorella vulgaris (meio C), ou Dunaliella tertiolecta (meio D). Os mesmos com ou sem a adição de ureia foram colocados em frascos de Erlenmeyer de 50mL contendo 20 mL de meio por 96 horas, 200 rpm e 30°. Foram analisados a densidade óptica (DO), biomassa, número de esporos, quantidade de endotoxinas produzidas e visualização dos cristais de endotoxinas por microscópio eletrônico de varredura. Os meios de cultura constituídos por líquido metabólico de C. vulgaris com e sem ureia, constituído pelo líquido metabólico de Scenedesmus sp. com uréia obtiveram os maiores valores de DO, biomassa, produção de esporos e de endotoxinas, com resultados próximos aos obtidos pelo meio de cultura padrão LB. Esses dados demonstram o potencial dos micro-organismo constituídos por extrato de palma e sobrenadantes de líquido metabólico dos micro-organismos fotossintetizantes para produção de endotoxinas produzidas por B. thuringiensis.
Efeito do soro de leite em culturas produtoras de exopolissacarídeos
(2020-01-31) Pinheiro, Ana Carolina Guedes; Soares, Maria Taciana Cavalcanti Vieira; http://lattes.cnpq.br/3917225553030089; http://lattes.cnpq.br/2487041798786829
O descarte inapropriado dos resíduos agroindustriais é uma problemática de importância nos tempos atuais, tendo em vista que se este for feito de forma indevida pode vir a acarretar prejuízos ambientais, como a destruição de ecossistemas. O soro de leite é um exemplo desses resíduos agroindustriais, resultante do processamento do leite em indústrias de derivados lácteos, se trata de um resíduo altamente nutritivo e, por este motivo, pode ser poluente se descartado de forma incorreta em ambientes aquáticos ou no solo. Sua reutilização vem sendo objeto de estudo, por ter várias utilidades como na indústria alimentícia, farmacêutica, cosmética, entre outras. Além disso, pode ser utilizado como meio alternativo para o crescimento de bactérias, como nas culturas de bactérias ácido láticas (BAL). Neste trabalho foi utilizado o soro de leite para o crescimento destas bactérias e posterior obtenção de exopolissacarídeos (EPS), produzidos por estas e de grande importância industrial e alimentícia. O objetivo geral é selecionar as bactérias ácido láticas que produzem a maior quantidade de EPS usando o soro de leite como seu substrato. O soro de leite foi caracterizado quanto a sua acidez (método Dornic); quanto ao pH (pHmetro digital); quanto ao teor de proteínas (método de Bradford, 1976); quanto ao teor de cinzas (gravimetria após incineração em forno de mufla); e quanto ao teor de lactose (cromatografia líquida). Além disso, foram extraídas as proteínas do soro pelo método do ácido térmico de Florêncio et al. (2009). A seleção da melhor produtora de EPS foi feita entre 30 BAL pertencentes ao LABTECBIO/CENAPESQ - UFRPE, da coleção de isolados de queijo coalho artesanal que foram produzidos no Agreste e no Sertão do estado de Pernambuco, onde estavam presentes os gêneros Lactobacillus sp., Enterococcus sp., Lactococcus sp. e Streptococcus sp. Estas estavam estocadas em LDR e glicerol e congeladas a -20º C foram reativadas em caldo de MRS e, após 18 horas, 1% do pré-inóculo foi cultivado no meio alternativo do soro de leite. A extração de EPS foi realizada após a centrifugação deste material e posterior precipitação no etanol gelado, onde foi novamente centrifugado e o pellet diluído em água ultrapura. A quantificação do EPS ocorreu a partir da utilização do método do ácido fenolsulfúrico. Os resultados obtidos quanto à caracterização do soro de leite foram os seguintes: acidez titulável entre 21º a 23º Dornic; pH 4,3; o teor de proteínas 1,10 mg/mL; cinzas 0,38% e lactose 0,96%. Quanto à seleção das melhores BAL produtoras de EPS, destacaram-se as pertencentes ao gênero Lactobacillus sp., que demonstraram a maior quantidade produzida de EPS, 6,33 mg/ml. O que leva a conclusão de que o soro de leite é um excelente meio de cultivo para BAL, principalmente ao gênero Lactobacillus sp., no que tange a produção de EPS.