01. Universidade Federal Rural de Pernambuco - UFRPE (Sede)
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Item Efeito da suplementação dietética com probiótico na taxa de sobrevivência e contagens total e diferencial de hemócitos de juvenis de Macrobrachium rosenbergii mantidos em sistemas de água clara e experimentalmente infectados com Vibrio parahaemolyticus(2019-12-04) Costa, Gisely Karla de Almeida; Silva, Suzianny Maria Bezerra Cabral da; http://lattes.cnpq.br/8569566022920336; http://lattes.cnpq.br/7944903151003071O presente trabalho avaliou o efeito da suplementação dietética de cepas probióticas nas contagens total e diferencial de hemócitos e sobrevivência em juvenis de M. rosenbergii. Foram ofertadas cinco dietas experimentais contendo cepas do gênero Bacillus candidatas a probiótico acrescidas à ração comercial (35% PB), sendo uma dieta controle e, quatro, submetidas à suplementação (IPA122; IPA240; IPA122+IPA240 e; probiótico comercial), com três repetições cada. Os animais foram acomodados em unidades experimentais com 40 L, com 30 camarões por unidade, sob aeração constante, e peso médio inicial de 0,3g. A oferta das dietas suplementadas teve duração de 30 dias, quando os animais foram alimentados três vezes ao dia a 8% da biomassa. Após esse período foi efetuado o desafio bacteriano com o V. parahaemolyticus por 21 dias quando foram testadas duas vias de infecção, ingestão e injeção do material infeccioso. Ao final de ambas as etapas, os animais (1 por unidade experimental) tiveram a hemolinfa coletada para determinação das contagens de hemócitos, e ao final do desafio foi calculada a mortalidade para cada tratamento. Os resultados obtidos demonstraram que os valores médios referentes à contagem total de hemócitos antes do desafio apresentaram valores mínimos e máximos variando entre 7,5×106 e 3,98×107 hemócitos/mL, entretanto não foi observada diferença significativa entre os tratamentos (p>0,05). Para a contagem diferencial de hemócitos foram identificados três tipos de células, hialinas, células semi-granulares e células granulares, contudo não foi identificada diferença significativa entre os valores percentuais médios obtidos dentre os tratamentos (p>0,05). Pós-desafio, a contagem total de hemócitos do tratamento 122+240 obteve uma das menores concentrações de células/ml em ambas as vias de infecção testadas. A contagem diferencial de hemócitos apresentou um perfil de concentração dos diferentes tipos de células distinto para cada via de infecção avaliada, na qual, a via injeção obteve um maior número de células semi-granulares, e a via de infecção ingestão uma maior concentração de células hialinas, os tratamentos 122+240 e 240 obtiveram uma maior concentração de células hialinas, esses resultados refletem na mortalidade encontrada para cada tratamento onde essas cepas (122+240 e 240) demonstraram a menor mortalidade, indicando que a suplementação com a cepa 122+240 apresenta um melhor desempenho imunoprofilático em um cenário de infecção de juvenis de M. rosenbergii com o Vibrio parahaemolyticus.Item Análise in silicode iniciadores de genes referência utilizados como normalizadores em estudos utilizando qPCR para avaliação da expressão de isolados de Klebsiella pneumoniae(2019) Fonseca, Bárbara Schneyder Oliveira Pereira da; Almeida, Anna Carolina Soares; Nascimento, Crisvânia Pedrosa dos Santos; http://lattes.cnpq.br/9308656350291661; http://lattes.cnpq.br/4891800920829895; http://lattes.cnpq.br/0924501124844316A Klebsiella pneumonia e é uma bactéria patogênica considerada “uma ameaça urgente à saúde humana”, pois é crescente o número de relatos de bactérias resistentes aos antibióticos, principalmente aos considerados de última linha para seu tratamento, como a colistina. Com isso, se faz necessário o entendimento de seus mecanismos de resistência, para saber as melhores formas de tratamento e desenvolver novas drogas para trataras infecções. Para isso a PCR quantitativa em tempo real em estudos de expressão relativa se tornou uma das ferramentas mais eficazes a fim de compreender o funcionamento bacteriano a nível transcricional, porém para que os resultados sejam confiáveis e reais é necessária a realização da etapa de normalização, que dentre os possíveis o mais comum é por meio do uso de genes de referência. Porém a escolha dos genes a serem utilizados como normalizadores dentre os genes apontados pela literatura tem se mostrado controversa e, em muitos casos, com pouca confiabilidade. Essa dificuldade seria eliminada se houvesse um banco de dados robusto, para diversos tipos de estudos para espécies além de humanos e ratos. Assim, surgiu a necessidade de avaliar dentre os estudos expressão gênica bacteriana utilizando a qPCR, os genes utilizados como normalizadores e os iniciadores utilizados para amplificá-los. Em uma análise da literatura, disponível no Pubmed, os genes 16Se rpoB foram os mais usados como normalizadores. Através de análises in silico feitas após a análise de literatura foi possível observar que de 38 sequências de pares de iniciadores analisados apenas quatro estavam dentro do padrão ideal sendo os melhores a serem utilizados em pesquisas posteriores, dentre as quatro apenas uma era referente a um dos genes mais utilizados, o 16S.