Relatório de Estágio Supervisionado Obrigatório (ESO) realizado no Laboratório de Embriões Bovinos – Universidade da Flórida, Gainesville - FL, Estados Unidos da América: efeito da adição de moduladores de cAMP durante a pré-maturação in vitro na produção de embriões bovinos

Abstract

O Estágio Supervisionado Obrigatório (ESO) em Medicina Veterinária foi realizado na área de Reprodução Animal com ênfase em Produção In Vitro de Embriões (PIVE) no Bovine Embryo Lab (Laboratório de Embriões Bovinos), da Universidade da Florida, no período de 06 de Novembro de 2022 a 27 de Janeiro de 2023, de segunda à sexta-feira, com carga horária de 40 horas semanais, perfazendo um total de 420 horas. As atividades de estágio foram coordenadas pelo orientador Prof. Dr. André Mariano Batista, professor adjunto da UFRPE, e pelo supervisor Dr. Peter James Hansen, professor titular na Universidade da Florida. No ESO foi vivenciada a rotina do Laboratório de Embriões Bovinos, desde preparação dos meios, produção de embriões in vitro, até analise das células por reação em cadeia da polimerase (PCR). Durante o período de estágio, além das diversas atividades de rotina e acompanhamento das pesquisas em curso no laboratório, foi possível conduzir um experimento sob minha responsabilidade. Portanto, o presente relatório tem por objetivo descrever as atividades vivenciadas durante a realização do ESO, bem como descrever os resultados do estudo que teve por objetivo avaliar a ação de moduladores de cAMP (monofosfato de adenosina cíclico) durante a pré-maturação in vitro de oócitos bovinos. Sendo a pré-maturação in vitro a etapa utilizada para investigar os efeitos do adiamento da retomada da meiose por meio de moduladores, de forma que oócito obtenha a maturação citoplasmática completa e consequentemente alcance a competência oocitária para seu desenvolvimento subsequente. Ovários bovinos foram coletados em abatedouros comerciais e os oócitos obtidos, pelo método de slashing, foram subsequentemente divididos entre os seguintes grupos experimentais: grupo controle, sem adição de moduladores, e o grupo tratado contento 22 μg/mL de IBMX e 49 μg/mL de dbcAMP, em meio de pré-maturação (TCM199/Bicarbonato, suplementado com glutamina, piruvato de sódio, Pen/Strep e soro fetal bovino), cultivados por 2 horas a 38,5 °C e 5% de CO2 em umidade máxima. Para critério de avaliação, consideramos as taxas de desenvolvimento embrionário inicial e a expressão de genes de manutenção pela técnica de RT-PCR de cada grupo. Os resultados demonstraram que a exposição aos moduladores durante a pré-maturação oocitária in vitro não afetou as taxas de blastocistos, como refletido pela ausência de diferença significativa (P> 0,05), entre os grupos. A adição dos moduladores também não afetou a expressão gênica, não demonstrando resultados diferentes entre os grupos. Conclui-se que, nas condições experimentais do presente estudo, que a adição de moduladores de cAMP durante a pré-maturação in vitro de oócitos bovinos, não afeta a taxa de produção de blastocistos, nem altera a expressão de genes relacionados à qualidade embrionária. Portanto, a experiência do ESO trouxe a oportunidade de aprender, vivenciar e executar atividades enriquecedoras no âmbito pessoal e profissional dentro da área de reprodução animal.